Полное собрание законодательства СССР
Система доступа к базе всех нормативно-правовых актов Союза Советских Социалистицеских Республик.
www.ussrdoc.com

 





Сборники документов по хронологии с 1917г по 1992г
| Сборник 1 | Сборник 2 | Сборник 3 | Сборник 4 | Сборник 5 | Сборник 6 | Сборник 7 | Сборник 8 | Сборник 9 | Сборник 10 |



 

Утверждены

Минздравом СССР

19 сентября 1979 г. N 2084-79

30 июня 1984 г. N 3059-84

4 октября 1988 г. N 4699-88

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТИАБЕНДАЗОЛА (ТЕКТО) В ОВОЩАХ

И ФРУКТАХ (ЯБЛОКИ, ЛИМОНЫ, АПЕЛЬСИНЫ, ТОМАТЫ, МОРКОВЬ,

ЛУК, КАРТОФЕЛЬ, СВЕКЛА, КАПУСТА), ЗЕРНОВЫХ (ПШЕНИЦЕ, РИСЕ),

ПОЧВЕ И ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

 

--------------------------------

<*> Разработаны Л.И. Лещинским, К.Ф. Новиковой, Н.Е. Ремизовой (ВНИИХСЗР).

 

    Краткая  характеристика  препарата.  Тиабендазол  (текто)  -  системный

фунгицид   широкого   спектра   действия.   Действующее   начало  препарата

2-(4-тиазолил) бензимидазол. Брутто - формула  C  H N S. Молекулярная масса

                                                10 7 3

201,3.  В чистом виде - кристаллы белого цвета, т. пл. 296 - 304 °C. Хорошо

растворим  в  ацетоне (2,8 мг/мл), этилацетате (1,7 мг/мл). Растворимость в

воде  при 25 °C меняется в зависимости от pH. При pH 5 - 12 составляет 0,05

мг/л, при pH < 5 она возрастает и при pH 2 - 10 г/л.

В картофеле МДУ 1 мг/кг, томатах - 0,1, зерне хлебных злаков - 0,2 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на извлечении тиабендазола из овощей и фруктов этилацетатом, перераспределении в соляную кислоту, а затем, после подщелачивания раствора, - в этилацетат, насыщенный водой, с последующим определением методом ТСХ. Экстракты из пшеницы дополнительно очищают микросублимацией в вакууме.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 138.

 

Таблица 138

 

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

 

┌───────────────┬────────────┬────────────────┬─────────────┬─────────────┐

│ Анализируемый │   Предел   │Среднее значение│ Стандартное │Доверительный│

    объект     │определения,│  определения   │ отклонение    интервал  

                  мг/кг      стандартных   │ при n = 5,    среднего  

                 или мг/л  │ количеств при        %      при p = 0,95 │

                              n = 15, %                 │ и n = 5, % 

├───────────────┼────────────┼────────────────┼─────────────┼─────────────┤

│Яблоки         │0,07        │79              │+/- 7        │79 +/- 9    

│Лимоны         │0,07        │78              │+/- 9        │78 +/- 11   

│Апельсины      │0,07        │83              │+/- 12       │83 +/- 15   

│Томаты         │0,07        │86              │+/- 8        │86 +/- 10   

│Морковь        │0,07        │95              │+/- 5        │95 +/- 6    

│Лук            │0,07        │93              │+/- 7        │93 +/- 8    

│Капуста        │0,07        │97              │+/- 6        │97 +/- 1    

│Картофель      │0,07        │83              │+/- 11       │83 +/- 14   

│Свекла         │0,07        │83              │+/- 11       │83 +/- 14   

│Пшеница        │0,1         │85              │+/- 6        │85 +/- 7    

│Рис            │0,1         │79              │+/- 5        │79 +/- 6    

│Почва          │0,14        │80              │+/- 10       │80 +/- 12   

│Вода           │0,002       │83              │+/- 5        │83 +/ 7     

└───────────────┴────────────┴────────────────┴─────────────┴─────────────┘

 

Примечание. Предел обнаружения - 1 мкг.

 

Избирательность метода. Метод селективен. Беномил, БМК, ридомил, байлетон, ФОП и ХОП определению не мешают.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Этилацетат свежеперегнанный. Гексан ч.д.а. Хлороформ ч.д.а. Спирт этиловый, 96-процентный. Аммиак водный ч.д.а. Хлороводородная кислота (фиксанал) 0,1 н Едкое кали ч.д.а. Сульфат натрия безводный, ч.д.а. Уксусная кислота ч.д.а. Йодид калия х.ч. Карбонат натрия х.ч. Нитрат висмута основной ч.д.а.

Основной раствор - реактив Драгендорфа. Растворяют 850 мг основного азотнокислого висмута в 40 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл уксусной кислоты и раствор, содержащий 8 г KJ в 20 мл воды. Для проявления хроматограмм 1 мл полученного раствора разбавляют 2 мл уксусной кислоты и 10 мл дистиллированной воды (рабочий раствор). На обработку хроматограммы идет 2 - 3 мл раствора. Основной раствор стабилен при хранении в темном месте в течение длительного времени. Рабочий раствор готовят непосредственно перед обработкой хроматограммы. Стандартные растворы тиабендазола в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор N 1); 10 мкг/мл (раствор N 2) и 1 мкг/мл (раствор N 3). Растворы стабильны при хранении в холодильнике 2 года, а при комнатной температуре - 6 мес.

    Приборы,  аппаратура и посуда. Хроматоскоп или другой источник УФ-света

длиной волны 250 - 260 нм. Хроматографическая камера. Ротационный вакуумный

испаритель  с  набором  колб.  Аппарат  для  встряхивания.  Масляный насос.

Вакуумный  водоструйный насос. Колбы: плоскодонные на 500 мл; конические на

500 мл;  грушевидные на 50 мл;  мерные на 100 мл.  Цилиндры  мерные на 10 и

100  мл. Пробирки градуированные с пробками на шлифах с оттянутым концом на

5 мл. Микрошприц на 500 мкл. Пипетки на 1; 2 и 5 мл. Делительные воронки на

250  и  500  мл.  Пульверизаторы  стеклянные.  Пластинки  "Силуфол"  УФ   .

                                                                       254

Кофейная мельница. Почвенное сито.

Подготовка хроматографических камер. За 1 ч до начала хроматографирования камеры заполняют смесью подвижных растворителей хлороформ-этиловый спирт-аммиак (100:10:0,2) и гексан-ацетон-аммиак (50:50:0,1) для насыщения камеры парами подвижных растворителей. Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем на 0,7 - 1 см от уровня дна камеры.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Измельченную с помощью ножа пробу овощей или фруктов (15 г) помещают в плоскодонную колбу на 500 мл, заливают 50 мл этилацетата и экстрагируют фунгицид в течение 30 мин. с помощью механического встряхивания колбы. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 500 мл. Экстракцию тиабендазола повторяют еще 2 раза тем же количеством этилацетата. Из объединенного экстракта извлекают фунгицид 0,1 н раствором соляной кислоты 3 раза порциями по 30 мл. Этилацетатный слой отбрасывают. Солянокислую фракцию собирают в другой делительной воронке на 250 мл. К объединенному раствору приливают 3,5 мл 4 н KOH до pH 10 и экстрагируют тиабендазол 5 раз этилацетатом, насыщенным водой, порциями по 30 мл. Объединенный в конической колбе на 500 мл экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (25 - 30 г), затем порциями фильтруют через бумажный фильтр в грушевидную колбу на 50 мл и каждый раз отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 - 2 мл. Последнюю порцию растворителя отгоняют до объема - 0,1 мл. При хроматографировании пробу наносят полностью.

Навеску размолотого риса (20 г) помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 75 мл этилацетата и экстрагируют фунгицид в течение 30 мин. с помощью механического встряхивания колбы. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку вместимостью 500 мл. Экстракцию тиабендазола повторяют еще 2 раза тем же количеством этилацетата. Из объединенного экстракта фунгицид извлекают 0,1 н раствором соляной кислоты 3 раза порциями по 30 мл. Этилацетатный слой отбрасывают. Солянокислотную фракцию собирают в другой делительной воронке вместимостью 250 мл. К объединенному раствору пипеткой добавляют 4,5 мл 4 н NaOH до pH 12 и тщательно встряхивают воронку. Экстрагируют тиабендазол 5 раз этилацетатом порциями по 30 мл. Объединенный этилацетатный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (25 - 30 г), затем порциями фильтруют через бумажный фильтр в грушевидную колбу вместимостью 50 мл и каждый раз отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 - 2 мл. Последнюю порцию растворителя отгоняют досуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 1 мл ацетона. Колбу закрывают пробкой и ее стенки тщательно обмывают растворителем. На хроматограмму наносят микрошприцем аликвотную часть полученного раствора (от 0,1 до 0,5 мл).

Навеску пшеницы (20 г) проводят через все операции, как и навеску риса. Сконцентрированный до объема 1 - 2 мл экстракт с помощью 10 - 12 мл ацетона переносят в патрон сублиматора (см. рис. 1) и проводят доочистку экстракта микросублимацией в вакууме в течение 20 мин. при температуре более 90 °C и давлении 6,67 Па (0,05 мм рт. ст.). По окончании сублимации тиабендазол смывают с помощью "пальца" сублиматора 10 мл ацетона в градуированную пробирку вместимостью 10 мл. В пробирку помещают заплавленный в верхней части стеклянный капилляр и ее содержимое концентрируют на горячей водяной бане до объема 1 мл. Пробирку закрывают пробкой на шлифе. На хроматограмму наносят микрошприцем аликвотную часть раствора (от 0,1 до 0,5 мкл).

    Навеску  почвы  (15 г),  помещенную в плоскодонную  колбу  вместимостью

250 мл,  увлажняют 3 мл 1 н   раствора  Na CO  (20% массы пробы),  заливают

                                          2  3

50 мл  этилацетата  и  экстрагируют  тиабендазол  с  помощью  механического

встряхивания  колбы в течение 30 мин.  Дальнейший  анализ почвы проводят по

схеме, описанной для риса.

    В  1 л воды пипеткой добавляют 5 мл 1 н  раствора Na CO  и экстрагируют

                                                        2  3

тиабендазол   в  делительной  воронке  вместимостью  500  мл  этилацетатом,

насыщенным  водой,  4  раза порциями по 150; 100; 50 и 50 мл. Из экстракта,

объединенного   в   делительной   воронке  вместимостью  0,5  л,  извлекают

тиабендазол  0,1  н   хлороводородной  кислотой  трижды  порциями по 30 мл.

Дальнейшие определения проводят по схеме, описанной для риса.

Хроматографирование. Остаток, полученный из экстрактов овощей и фруктов, с помощью стеклянного капилляра количественно наносят на пластинку "Силуфол" УФ254. Справа и слева от пробы капилляром наносят стандартные растворы тиабендазола, содержащие 1; 2; 3; 4 и 5 мкг препарата. Стандартные растворы готовят следующим образом: в серию конических пробирок пипеткой помещают 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл стандартного раствора N 2 и концентрируют растворы, нагревая пробирки на водяной бане до объема ~ 0,1 мл.

    Аликвотную  часть  полученных экстрактов из пшеницы, риса, почвы и воды

(0,1   -   0,5   мл)   с   помощью   микрошприца  на  500  мкл  наносят  на

хроматографическую  пластинку  "Силуфол" УФ   . Справа и слева от пробы тем

                                           254

же  шприцем  наносят серию стандартных растворов тиабендазола с содержанием

1; 2; 3; 4 и 5 мкг. Шкалу стандартов при аликвоте 0,1 мкл и 0,5 мкг готовят

в градуированных пробирках согласно таблице 139.

 

Таблица 139

 

ШКАЛА СТАНДАРТОВ

 

┌───────────────────────────────┬───────────────────────────────┬─────────┐

       Нанесение 0,1 мл               Нанесение 0,5 мл        │Нанесено │

├───────────┬───────┬───────────┼───────────┬───────┬───────────┤на плас- │

│стандартный│ацетон,│содержание,│стандартный│ацетон,│содержание,│тинку,  

│раствор, мл│  мл     мкг/мл   │раствор, мл│  мл     мкг/мл   │мкг     

├───────────┼───────┼───────────┼───────────┼───────┼───────────┼─────────┤

│1          │9      │1          │2          │8      │0,2        │1       

│2          │8      │2          │4          │6      │0,4        │2       

│3          │7      │3          │6          │4      │0,6        │3       

│4          │6      │4          │8          │2      │0,8        │4       

│5          │5      │5          │10         │0      │1          │5       

└───────────┴───────┴───────────┴───────────┴───────┴───────────┴─────────┘

 

Аналогичным образом готовят стандартные растворы при нанесении аликвоты, промежуточной между 0,1 и 0,5 мкл.

    При  определении  тиабендазола в овощах, фруктах, пшенице, воде и почве

хроматограмму     развивают     в     системе    подвижных    растворителей

гексан-ацетон-аммиак   (50:50:0,1)   или   хлороформ-этиловый  спирт-аммиак

(100:10:0,1).  При  определении  фунгицида  в рисе предварительно развивают

хроматограмму  в  хлороформе,  а  затем  после  высушивания  -  в  одной из

указанных выше систем подвижных растворителей. После развития хроматограммы

и  высушивания пластинок на воздухе пятна тиабендазола проявляют под лампой

УФ-света.  Зоны  локализации  тиабендазола обнаруживаются в виде фиолетовых

пятен  па зеленом фосфоресцирующем фоне с R  0,49 +/- 0,02 в первой системе

                                           f

ПР  и 0,57 +/- 0,02 - во второй. Пятна можно наблюдать в течение нескольких

месяцев.  Линейный диапазон детектирования 1 - 5 мкг. При необходимости для

обнаружения  пятен  можно  использовать  реактив Драгендорфа. При обработке

хроматограмм  этим проявителем тиабендазол проявляется на пластинках в виде

оранжевых пятен на белом фоне, с линейным диапазоном определения 1 - 5 мкл.

Пятна стабильны в течение 7 - 8 мин.

Обработка результатов анализа. Количественное определение тиабендазола проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов. Содержание тиабендазола в анализируемой пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

 

                                     AV

                                 X = ---,

                                     V P

                                      а

 

    где:

    A - содержание тиабендазола в хроматографируемой пробе, мкг;

    V - общий объем   раствора,   из   которого   отбирают   аликвоту   для

хроматографирования, мл;

    V   -  объем  аликвоты,  отобранный  для  хроматографирования,  мл (при

     а

внесении всей пробы V  = V);

                     а

    P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. Соблюдать требования безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и пестицидами.

 

 






Яндекс цитирования

© www.ussrdoc.com, 2011.