Полное собрание законодательства СССР
Система доступа к базе всех нормативно-правовых актов Союза Советских Социалистицеских Республик.
www.ussrdoc.com

 





Сборники документов по хронологии с 1917г по 1992г
| Сборник 1 | Сборник 2 | Сборник 3 | Сборник 4 | Сборник 5 | Сборник 6 | Сборник 7 | Сборник 8 | Сборник 9 | Сборник 10 |



 

Утверждены

Минздравом СССР

14 июля 1988 г. N 4661-88

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КМП И ЕГО МЕТАБОЛИТА МП В ВОДЕ,

ПОЧВЕ, РАСТИТЕЛЬНОМ И БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ

МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

 

--------------------------------

<*> Разработаны Ю.А. Бунятяном, М.С. Петросян (Филиал ВНИИГИНТОКС).

 

Препарат КМП рекомендуется для применения в сельском хозяйстве в качестве ингибитора нитрификации азотных удобрений на посевах риса, пшеницы, овощей, хлопчатника. МП - продукт разложения КМП.

    Краткая характеристика препаратов. КМП - 1-карбамоил-3(5)-метилпиразол.

Брутто-формула  C H N O.  Молекулярная   масса  125,1.   Химически   чистое

                 5 7 3

соединение - кремоватый порошок  с  резким  запахом,  т. пл. 127 °C. Хорошо

растворим в ацетоне,  хлороформе,  этаноле,  растворимость в воде 6,5 мг/л.

При  нагревании  до  180 °C,  а также  при  действии  разбавленных кислот и

щелочей  разлагается с образованием МП.  КМП - среднетоксичное  соединение,

ЛД   для крыс составляет 1280 мг/кг. МП - 3(5)-метилпиразол. Брутто-формула

  50

C H N .   Молекулярная   масса   82,1.    Химически   чистое   соединение -

 4 6 2

светло-желтая    жидкость   с   пиридиноподобным    запахом,     плотностью

1,008 мг/куб. м  при 20 °C,  т. кип. 204 °C.  Неограниченно  смешивается  с

водой  и  большинством  органических растворителей.  МП  -  среднетоксичное

соединение, ЛД   для крыс составляет 240 мг/кг.

              50

Принцип метода. Метод основан на извлечении КМП и МП из исследуемой пробы органическим растворителем, очистке экстрактов в кислой среде, реэкстракции препаратов в щелочной среде и хроматографическом разделении в тонком слое пластинок "Силуфол". Зоны локализации препарата и его метаболита обнаруживаются после предварительного облучения УФ-светом и обработки пластинок йод-крахмальным реагентом или реагентом Паули.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблице 128.

 

Таблица 128

 

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА (n = 20, p = 0,95)

 

┌─────────────┬──────────┬─────────────┬────────┬───────────┬─────────────┐

Анализируемый│Предел      Диапазон   │Среднее │Стандартное│Доверительный

   объект    обнаруже- │определяемых │значение│отклонение,│  интервал  

             ния, мг/кг│концентраций,│опреде-     %     │ среднего, % │

             │или л     │ мг/кг или л │ления, %│                       

├─────────────┴──────────┴─────────────┴────────┴───────────┴─────────────┤

                                   КМП                                   

                                                                        

│Вода         │0,01      │0,01 - 0,1   │93,0    │+/- 3,07   │+/- 1,40    

│Почва        │0,04      │0,04 - 0,4   │85,0    │+/- 1,77   │+/- 0,82    

│Рис          │0,04      │0,04 - 0,4   │90,2    │+/- 3,15   │+/- 1,47    

│Пшеница      │0,04      │0,04 - 0,4   │89,6    │+/- 2,96   │+/- 1,38    

│Кукуруза     │0,04      │0,04 - 0,4   │85,0    │+/- 1,41   │+/- 0,67    

│Томаты       │0,08      │0,08 - 0,4   │85,0    │+/- 1,47   │+/- 0,82    

│Картофель    │0,08      │0,08 - 0,4   │83,0    │+/- 1,99   │+/- 1,00    

Биосубстраты │0,2       │0,2 - 2,0    │89,0    │+/- 2,53   │+/- 1,04    

                                                                         

                                   МП                                   

                                                                        

│Вода         │0,01      │0,01 - 0,1   │93,0    │+/- 3,07   │+/- 1,4     

│Почва        │0,04      │0,04 - 0,4   │89,0    │+/- 1,89   │+/- 0,78    

│Рис          │0,04      │0,04 - 0,4   │91,0    │+/- 5,3    │+/- 2,19    

│Пшеница      │0,04      │0,04 - 0,4   │90,4    │+/- 4,45   │+/- 1,34    

│Кукуруза     │0,04      │0,04 - 0,4   │89,0    │+/- 2,53   │+/- 1,04    

│Томаты       │0,08      │0,08 - 0,4   │85,0    │+/- 1,77   │+/- 0,82    

│Картофель    │0,08      │0,08 - 0,4   │81,1    │+/- 1,83   │+/- 0,76    

Биосубстраты │0,2       │0,2 - 2,0    │85,0    │+/- 1,77   │+/- 0,82    

└─────────────┴──────────┴─────────────┴────────┴───────────┴─────────────┘

 

Избирательность метода. В предлагаемых условиях хроматографирования метод специфичен в присутствии близких по структуре и области применения таких соединений, как нитрапирин, 6-хлорпиколиновая кислота, ХГИ, ТМДИ, ГМДИ, АТГ, а также применяющихся на посевах риса - пропанид, базагран.

    Реактивы  и  материалы.  КМП  х.ч. МП х.ч. Хлороформ х.ч. н-Гексан х.ч.

Этиловый  спирт  х.ч.  Хлороводородная кислота концентрированная х.ч., 1 н.

Безводный   сульфат   натрия  ч.  Ацетон  х.ч.   Натрия   гидроксид   х.ч.,

20-процентный. Гидроксид калия х.ч.,  10-процентный.  Нитрит  натрия  х.ч.,

10-процентный.    Кислота    сульфаниловая    безводная,    ч.д.а.    Калий

марганцовокислый х.ч.,  3-процентный.  Йодид калия х.ч., 1-процентный  в.р.

Крахмал водорастворимый х.ч.,  3-процентный.  Фильтры бумажные обеззоленные

"синяя лента",  предварительно   промытые   смесью хлороформ-ацетон  (1:1).

Пластинки   хроматографические   "Силуфол"   УФ      размером   15 x 15 см.

                                               254

Стандартные  растворы  КМП и МП,  содержащие 1; 10 и 100 мкг/мл.  Хранить в

холодильнике не более 3 мес.

Проявляющие реагенты: N 1 - сульфаниловая кислота диазотированная (реагент Паули). Приготовление соли диазония: 5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 25 мл 10-процентного раствора гидроксида калия. Охлажденный раствор смешивают с 25 мл 10-процентного раствора нитрита натрия. Этот раствор по каплям при перемешивании прибавляют к охлажденной льдом хлороводородной кислоте (40 мл хлороводородной кислоты + 20 мл дистиллированной воды). Выпавший осадок отмывают на воронке Бюхнера спиртом и сушат на фильтре. При хранении в холодильнике в темной склянке соль устойчива 3 мес. Для опрыскивания готовят рабочий раствор - 1,5-процентный раствор диазониевой соли в 15-процентном растворе гидроксида натрия. Раствор готовят перед употреблением в количествах, необходимых для разового пользования; N 2 - йод-крахмальные реагенты: а - 1-процентный раствор йодида калия; б - 3-процентный раствор крахмала. Перед употреблением смешать растворы а, б и этанол в соотношении 2,5:2,5:1. Раствор для хлорирования. Смешивают равные объемы 3-процентного раствора перманганата калия и 25-процентного раствора хлороводородной кислоты. Готовят перед употреблением в количествах, необходимых для разового пользования.

Приборы, аппаратура, посуда. Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4. Ротационный вакуумный испаритель. Колбы: мерные на 100 мл; конические на 100 и 250 мл; круглодонные на 100 мл. Воронки делительные и химические. Микропипетки на 0,1 и 0,2 мл. Цилиндры мерные на 50 и 100 мл. Камера хроматографическая. Пульверизаторы стеклянные. Камера для хлорирования (эксикатор).

Отбор проб. Отобранные пробы анализировать сразу.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (100 мл) помещают в коническую колбу, прибавляют безводный сульфат натрия до насыщения и экстрагируют КМП и МП хлороформом трижды порциями по 50; 30 и 30 мл. Объединенные экстракты фильтруют в перегонные колбы через фильтр "синяя лента" и слой безводного сульфата натрия (1 - 2 г) и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре не более 30 °C до объема 0,1 - 0,2 мл. Остаток количественно с помощью хлороформа наносят на хроматографическую пластинку.

Навеску (25 г) измельченной и просеянной почвы трижды экстрагируют ацетоном порциями по 50 мл. Объединенные экстракты фильтруют через фильтр "синяя лента" и слой безводного сульфата натрия (1 - 2 г) и отгоняют растворитель досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °C. К сухому остатку прибавляют 10 мл 1 н раствора хлороводородной кислоты, тщательно ополаскивают колбу и переносят в коническую колбу на 100 мл через фильтр "синяя лента". Колбу еще дважды по 10 мл промывают 1 н раствором хлороводородной кислоты и сливают в ту же колбу. Объединенный экстракт хлороводородной кислоты подщелачивают 20-процентным раствором гидроксида натрия до pH 9, затем прибавляют безводный сульфат натрия до насыщения (10 - 12 г) и экстрагируют КМП и МП хлороформом трижды по 15 - 20 мл. Далее поступают аналогично анализу воды.

Измельченную пробу растительного материала (рис, пшеница, кукуруза, картофель, томаты) (25 г) экстрагируют хлороформом трижды по 50 мл. Растворитель фильтруют в перегонную колбу через фильтр "синяя лента" и слой безводного сульфата натрия. Далее поступают аналогично анализу почвы.

Экстракцию из биологического материала (кровь, печень, легкие, почки, сердце, селезенка, мозг, моча, кал) проводят следующим образом. Измельченную пробу (5 г или 5 мл) трижды экстрагируют хлороформом по 15 - 20 мл. Объединенный экстракт фильтруют в перегонную колбу через фильтр "синяя лента" и слой безводного сульфата натрия. Далее поступают аналогично анализу почвы.

Условия хроматографирования. После отгонки растворителя пробы с помощью хлороформа количественно наносят на пластинки "Силуфол" на расстоянии 1 см от нижнего края пластинки. Справа и слева от пробы наносят стандартные растворы КМП и МП (в одну точку), содержащие известные количества препаратов. Развитие хроматограммы проводят в системе гексан-ацетон (5:3). После поднятия фронта растворителя на 14 см пластинку проветривают на воздухе до полного удаления растворителей. Затем пластинку подвергают облучению УФ-светом и течение 35 - 40 мин. и обрабатывают из пульверизатора проявляющими реагентами N 1 или N 2.

1. Опрыскивание рабочим раствором реагента Паули (на одну пластинку расходуется 1,5 - 2 мл реагента). Зоны локализации КМП и МП обнаруживаются в виде красных пятен на белом фоне. Окраска пятен МП устойчива в течение нескольких дней, КМП - 5 - 10 мин. Предел обнаружения на пластинке составляет для КМП 2 мкг; МП - 0,5 мкг.

    2. После  УФ-облучения   пластинки  помещают  в  камеру с раствором для

хлорирования  на 3 мин., оставляют пластинку на воздухе до полного удаления

запаха   хлора   (около   15   мин.)   и   обрабатывают  из  пульверизатора

йод-крахмальным  проявляющим  реагентом.  Зоны локализации обнаруживаются в

виде синих пятен на светлом фоне. Окраска пятен устойчива в течение 3 дней.

Предел  обнаружения  на пластинке составляет для КМП 0,1 мкг, для МП 1 мкг.

Величины R  составляют для КМП 0,55 +/- 0,02, для МП 0,35 +/- 0,02.

          f

Обработка результатов анализа. Количественную оценку проводят путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартных растворов. Содержание КМП и МП в анализируемой пробе (X, мг/кг или л) определяют по формуле:

 

                                      A

                                  X = -,

                                      P

 

где:

A - количество КМП, МП, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;

P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях.

 

 






Яндекс цитирования

© www.ussrdoc.com, 2011.