Полное собрание законодательства СССР
Система доступа к базе всех нормативно-правовых актов Союза Советских Социалистицеских Республик.
www.ussrdoc.com

 





Сборники документов по хронологии с 1917г по 1992г
| Сборник 1 | Сборник 2 | Сборник 3 | Сборник 4 | Сборник 5 | Сборник 6 | Сборник 7 | Сборник 8 | Сборник 9 | Сборник 10 |



 

Утверждены

Минздравом СССР

28 декабря 1982 г. N 2647-82

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТРИХЛОРМЕТАФОСА-3 И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ

В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ

 

Краткая характеристика трихлорметафоса-3 (ТХМ-3) приведена в Унифицированной методике. ДСД трихлорметафоса-3 - 0,01 мг/кг. Содержание в продуктах животноводства не допускается. При метаболизме ТХМ-3 в организме теплокровных образуются хлорфенолы различной степени хлорирования (моно-, ди-, трихлорфенолы). Главным метаболитом является 2,4,5-трихлорфенол (2,4,5-ТХФ), который токсичнее ТХМ-3 в 2 - 3 раза. Кроме того, образуются 2,4-дихлорфенол (2,4-ДХФ) и орто-хлорфенол (о-ХФ). Т. пл. 2,4,5-ТХФ 68 °C, т. кип. 246 °C, т. пл. 2,4-ДХФ 45 °C, т. кип. 210 °C, т. пл. о-ХФ 7 °C (альфа) и 0 °C (бета), т. кип. 175,6 °C. 2,4,5-ТХФ и 2,4-ДХФ - белые кристаллические вещества, о-ХФ - жидкость. Хлорфенолы, особенно о-ХФ, обладают неприятным запахом. Хорошо растворимы в спирте, эфире, бензоле, растворимость в воде при 20 °C составляет для 2,4,5-ТХФ до 0,1%, для о-ХФ - до 3%.

Принцип метода. Метод основан на извлечении остатков ТХМ-3 и хлорфенолов из проб биоматериала (печень, почки, головной мозг, мышцы, кровь, кал, моча) смесью органических растворителей - хлористого метилена и гексана (2:1) с добавлением этилового спирта; концентрировании экстракта и последующем определении на газовом хроматографе с ДЭЗ или ДПР. Высокая селективность детектора и малые навески проб позволяют избежать при анализе стадии очистки экстрактов без ухудшения работы колонки в течение длительного времени (около 3000 анализов).

Метрологическая характеристика метода. Нижний предел определения ТХМ-3 0,3 мг/кг, хлорфенолов 0,1 мг/кг, минимально детектируемое количество ТХМ-3 0,2 нг, хлорфенолов 0,1 нг. Среднее значение определения 85,0 +/- 2,8 (при p = 0,95).

Избирательность метода. Определению не мешают другие ХОП и ФОП. На колонке с полиэтиленгликольадипинатом определению ТХМ-3 мешает трихлорметафос. Метод применим для анализа гомогената крови, гомогенатов печени, головного мозга, почек, мышц, а также кала и мочи.

Реактивы и растворы. Хлористый метилен х.ч. н-Гексан х.ч. Натрия сульфат безводный х.ч. или ч.д.а. Твердый носитель для ГЖХ - хезасорб AW или хезасорб W, хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм). Жидкая фаза - SE-30 или XE-60, OV-17, DC-200, ПФМС-4 и другие аналогичные, полиэтиленгликольадипинат (ПЭГА). Газ-носитель - аргон (чистый) или азот особой чистоты. Стекловата. Сахароза. Стандартные растворы ТХМ-3 и хлорфенолов в н-гексане: 10 мг вещества растворяют в мерной колбе на 100 мл в небольшом количестве гексана, раствор доводят до метки, хорошо перемешивают, плотно закрывают и хранят в холодильнике.

Приборы и посуда. Хроматограф с ДЭЗ или ДПР. Гомогенизатор стеклянный или микроизмельчитель тканей. Пипетки на 1; 2 и 10 мл. Колбы мерные на 100 мл. Стакан мерный на 200 или 300 мл. Воронки делительные на 50 или 100 мл. Пробирки химические. Ротационный испаритель ИР-1. Пробирки центрифужные с делениями для приготовления разбавленных стандартных растворов. Колбы круглодонные на 50 мл.

Подготовка к определению. Заполнение и подготовка к анализу газохроматографической колонки. Если отсутствует набивка колонки заводского приготовления, жидкую фазу на сорбент можно нанести самостоятельно. Для этого взвешивают необходимые количества твердого носителя и жидкой фазы. Сорбент (20 г) помещают в круглодонную колбу, заливают 100 мл хлороформа. Жидкую фазу смывают в ту же колбу микроколичеством хлороформа. Растворитель отгоняют под вакуумом при нагревании на водяной бане и непрерывном помешивании. Подготовленный носитель высушивают на фильтровальной бумаге в течение 12 ч и хранят в склянке с притертой пробкой.

Ход анализа. Экстракция и концентрирование экстрактов. Готовят 10-процентный гомогенат ткани (печени, почек, головного мозга, мышц, крови) в 0,25 М растворе сахарозы. Для анализа берут 1 мл гомогената.

Мочу берут в количестве 0,2 - 5 мл, кал 1 - 5 г; 1 мл гомогената, мочу или кал переносят в делительную воронку на 50 или 100 мл, прибавляют 1 мл этилового спирта и экстрагируют 4 мл смеси растворителей - хлористого метилена с гексаном (2:1) трижды, каждый раз отстаивая смесь в течение 10 - 15 мин. Перед экстрагированием твердые кусочки кала разбивают стеклянной палочкой, экстрагирование кала можно проводить непосредственно в пробирке. Экстракты объединяют, сушат в течение 1 ч безводным сульфатом натрия. Экстракты сливают в чистые пробирки, а отработанный сульфат натрия три раза ополаскивают свежими порциями растворителя по 3 - 5 мл и присоединяют растворитель к основному экстракту.

Экстракт упаривают при комнатной температуре досуха, на что уходит обычно 3 - 4 дня, или отгоняют на ротационном испарителе. Остаток в колбе смывают 1 мл гексана в пробирку. При естественном упаривании к сухому остатку в пробирке прибавляют 1 мл гексана, обмывая стенки пробирки, и количественно определяют на хроматографе.

    Условия  хроматографирования. Хроматограф "Цвет-106" или любой

другой  с  ДЭЗ или ДПР. Колонка стеклянная длиной 1 м с внутренним

диаметром 3 мм. Наполнение колонки: хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм)

+  5%  SE-30.  Температура  колонки  180  °C, испарителя - 210 °C.

Расход  газа-носителя  через  колонку  35 мл/мин., скорость потока

                                                            -12

продувочного  газа  - 150 мл/мин. Шкала электрометра 20 x 10    А.

Скорость  протяжки  ленты  600  мм/ч.  Объем вводимой пробы 1 мкл.

Время  удерживания:  ТХМ-3 - 3 мин. 39 с, 2,4,5-ТХФ - 1 мин. 12 с,

2,4-ДХФ - 34 с, о-ХФ - 20 с.

    При  использовании  колонки  с  ПЭГА  применяют  ДЭЗ  или ДПР.

Колонка  стеклянная  длиной  1  м  с  внутренним  диаметром  3 мм,

наполненная   хроматоном  N-AW  (0,16  -  0,20  мм)  с  10%  ПЭГА.

Температура  колонки  190  °C,  испарителя  и  детектора - 220 °C.

Расход  газа-носителя  (аргона)  через  колонку  43  мл/мин. Шкала

                    -12

электрометра 20 x 10    А. Скорость протяжки ленты 600 мм/ч. Объем

вводимой пробы 1 мкл.

Время удерживания на колонке с ПЭГА в этих условиях составляет: ТХМ-3 - 9 мин. 12 с, 2,4,5-ТХФ - 3 мин. 25 с, 2,4-ДХФ - 1 мин. 25 с, о-ХФ - 42 с.

Идентификация ТХМ-3 и хлорфенолов. Идентификацию проводят по времени выхода веществ в сравнении со стандартными растворами или путем добавок метчиков к экстрактам проб и повторного хроматографирования. Для повышения надежности идентификации используют колонку с фазой противоположной полярности, например с ПЭГА. Такая колонка особенно полезна для подтверждения идентификации хлорфенолов, имеющих на колонке с SE-30 короткое время выхода, особенно о-ХФ.

Обработка результатов анализа. Количественную обработку результатов проводят методом абсолютной калибровки по заранее построенным градуировочным графикам. Для этого вводят в хроматограф по 1 мкл стандартных растворов ТХМ-3 и хлорфенолов в гексане, содержащих 0,5; 1; 5 и 10 мкг/мл (каждого 3 - 5 раз) или 1; 2; 3; 5 и 10 мкл растворов определенной концентрации. По полученным данным строят график зависимости высот (или площадей) пиков от количества введенного пестицида.

Во время проведения анализов калибровку проверяют 1 - 2 раза в день. Измерив высоту пика (или площадь) определяемого вещества, по графику находят количество его в пробе. Расчет количества пестицидов в пробе (X, мг/кг или мг/л) проводят по формуле:

 

                                CVV

                                   1

                            X = -----,

                                V PV

                                 0  2

 

    где:

    C - количество пестицида, найденное по калибровочному графику,

нг;

    V  -  объем  экстракта,  из  которого  отбирают  аликвоту  для

дозирования в хроматограф, мл;

    V  - объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл;

     0

    P - навеска пробы, г (для мочи мл);

    V  - общий объем гомогената, мл;

     1

    V  - объем гомогената, взятый для анализа, мл.

     2

    При  анализе  мочи и  кала выражение  V  / V   в  расчетах  не

                                           1    2

используется.

Требования безопасности. Соблюдают правила безопасности, обычно рекомендуемые для химических лабораторий при работе с легковоспламеняющимися жидкостями, горючими и огнеопасными веществами, а также сосудами высокого давления (сжатыми газами).

 

 






Яндекс цитирования

© www.ussrdoc.com, 2011.