Полное собрание законодательства СССР
Система доступа к базе всех нормативно-правовых актов Союза Советских Социалистицеских Республик.
www.ussrdoc.com

 





Сборники документов по хронологии с 1917г по 1992г
| Сборник 1 | Сборник 2 | Сборник 3 | Сборник 4 | Сборник 5 | Сборник 6 | Сборник 7 | Сборник 8 | Сборник 9 | Сборник 10 |



 

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

19 октября 1979 г. N 2085-79

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АКТЕЛЛИКА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ,

В ПОЧВЕ И В ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ

И НА ГАЗОВОМ ХРОМАТОГРАФЕ

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

 

1. Краткая характеристика препарата

 

1.1. Актеллик

1.2. 0,0-диметил-0-(диэтиламино-6-метилпиримидил-4)тиофосфат

1.3. Структурная формула:

 

    CH O S          CH

      3 \||    --- /  3

         P-O-//   \\N

        /    \ ___ /

    CH O     N ---    C H

      3            \ / 2 5

                    N

                     \

                      C H                              Мол. масса = 305,35.

                       2 5

 

    1.4. Пиримифос-метил, ПП-511, актеллик

    1.5.  Химически  чистое  вещество актеллика представляет собой жидкость

светло-желтого   цвета.  Хорошо  растворяется  в  большинстве  органических

растворителей,  слабо  растворим  в  воде  -  5  мг/л  при температуре 30°.

                                                          -4

Удельный  вес  -  1,157  при  30°,  давление пара - 1 х 10  . Разрушается в

сильнокислых и щелочных средах.

    Препарат малотоксичен для теплокровных животных - при оральном введении

ЛД    для  мышей составляет 1180 мг/кг. Препарат опасен для птиц (ЛД   30 -

  50                                                                50

60 мг/кг) и рыб (ЛД   0,3 - 27 мг/кг).

                   50

Выпускается в форме 25-процентного концентрата эмульсии, 25-процентного препарата для ультрамалообъемного опрыскивания.

 

2. Методика определения актеллика

 

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

    Метод  основан  на  извлечении  актеллика  из  растительных проб и воды

органическими  растворителями  (хлороформом,  10 - 20-процентным ацетоном в

гексане   или   50-процентным   водным  ацетоном).  Из  почвы  экстрагируют

инсектицид  смесью  ацетона  с  0,05  н раствором CaCl . Очистка экстрактов

                                                      2

способом перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и на

хроматографических    колонках.    Количественное    определение   проводят

хроматографическим  в  тонком  слое  методом  или на газовом хроматографе с

термоионным детектором.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

 

                                               ГЖХ                  ТСХ

 

Минимально детектируемое количество        10 нг                0,5 - 3 мкг

Нижний предел определения                  0,002 мг/кг          0,1 мг/кг

P - размах варьирования, %

    в растениях                            85,0 - 91,0          86,0 - 91,5

    в почве                                92,5 - 97,5          92,5 - 97,6

_

с - среднее значение определения, %

    в растениях                            88,5                 85,5

    в почве                                95,0                 95,0

S - стандартное отклонение, %

    в растениях                            2,5                  2,5

    в почве                                2,5                  2,5

Доверительный интервал среднего при

P = 0,95 и n = 5, %

    для растений                                    88,5 +/- 2,5

    для почвы                                       95,0 +/- 2,5

 

2.1.3. Избирательность метода

Другие фосфорорганические инсектициды определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

    Хлороформ, х.ч., ГОСТ 3160-51, - CHCl .

                                         3

    Гексан, х.ч., МРТУ 6-09-2937-66, - CH (CH ) CH .

                                         3   2 4  3

    Ацетон, ч., ГОСТ 2603-63, - CH COCH .

                                  3    3

    Ацетонитрил, ч., МРТУ 6-09-6448-69, - CH CN.

                                            3

    Диметилформамид, ч., МРТУ 6-09-2068-65, - HCON(CH ) .

                                                     3 2

    Бензол, ч.д.а., ГОСТ 5955-68, - C H .

                                     6 6

    Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-66, - Na SO .

                                                            2  4

    Уголь активированный марки КАД - молотый или ОУ-А.

    Окись алюминия для хроматографии, МРТУ 6-09-5296-68-4, - Al O .

                                                               2 3

Силикагель КСК или пластинки "Силуфол UV-254".

5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм).

Азот, осч.

Водород.

Проявляющие реагенты:

0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане, после опрыскивания нагревание пластинки при 110° в течение 5 мин.

0,5-процентный раствор бриллиантового зеленого в ацетоне, затем экспозиция пластинки в парах брома 20 - 30 сек.

0,05-процентный раствор бромфенолового синего в 0,5-процентном растворе азотнокислого серебра, приготовленного на ацетоне. После проветривания хроматограммы и прогревания ее в термостате при 35 - 40° вновь опрыскивают 5-процентным раствором уксусной кислоты (лимонной кислоты).

2-процентный раствор 4-(P-нитробензил)пиридина в ацетоне после нагревания хроматограммы при 110° в течение 5 мин. вновь опрыскивают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина в ацетоне.

Реактив Драгендорфа: раствор А - 0,85 г азотнокислого висмута растворяют в смеси 40 мл дистиллированной воды и 100 мл 40-процентной серной кислоты (серную кислоту можно заменить 10 г винной кислоты); раствор Б - 8 г йодистого калия растворяют в 20 мл воды. Растворы А и Б смешивают. Перед употреблением к 6 мл полученной смеси приливают 6 мл 20-процентной серной кислоты (или 12 г винной кислоты) и доводят объем до 25 мл водой.

Стандартный раствор актеллика в ацетоне или в гексане - 1,0 - 5,0 мкг/мл.

2.3. Приборы и посуда

Колбы конические со шлифами и пробками на 50 и 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные со шлифами для отгонки растворителей, ГОСТ 10394-72.

Делительные воронки на 50 и 100 мл, ГОСТ 8613-75.

Воронки, ГОСТ 8613-75.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74.

Колонки для адсорбционной хроматографии (300 х 15 мм), МРТУ 42-2590-66.

Аппарат для встряхивания колб.

Ротационный вакуумный испаритель, МРТУ 42-2589-66.

Холодильник бытовой.

Термостат.

Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-63.

Микропипетки 0,1 - 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.

Хроматоскоп (хемоскоп).

Камера для опрыскивания, ГОСТ 10565-63.

Опрыскиватель, ГОСТ 19391-68.

Микрошприцы на 10 мкл.

Газовый хроматограф с термоионным детектором (ДТИ).

2.4. Подготовка к определению

Растительную пробу (овощи, фрукты, зеленую массу) измельчают ножом на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.

Почву в естественном состоянии или воздушно-сухую просеивают через сито и для анализа отбирают 10 г.

Проба воды - 100 мл.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 мл, пробы воды - в делительные воронки, куда добавляют по 10 г хлористого натрия.

Из растений актеллик экстрагируют трижды по 50 мл 20-процентного ацетона в гексане либо 50-процентным водным ацетоном, либо 50 мл хлороформа; из почвы - 50 мл смеси ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1); из воды - хлороформом порциями: 120, 100, 75 мл. Экстрагируют при встряхивании в течение 1 часа. Экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр. Объединенные экстракты помещают на 1 час в холодильник. При выпадении осадка пробы следует отфильтровать вторично. Экстракты подвергаются очистке:

а) очистка после экстракции 20-процентным ацетоном в гексане. Экстракт помещают в делительную воронку и отделяют водно-ацетоновую фракцию от гексановой. Водно-ацетоновую фракцию промывают гексаном еще два раза. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия, концентрируют под вакуумом при 40 - 50° до 5 мл. После охлаждения добавляют к ним 5 мл холодного ацетонитрила. Ацетонитрил можно заменить диметилформамидом, однако с первым растворителем очистка происходит значительно лучше. Пробу встряхивают 1 - 2 мин. Гексановый слой отделяют в делительной воронке и вторично дважды чистят пробу ацетонитрилом (диметилформамидом), если это необходимо. Ацетонитрильные (диметилформамидные) экстракты объединяют, переносят в делительную воронку, добавляют к ним 30 мл воды и 20 мл гексана, встряхивают 1 - 2 мин. и после разделения слоев гексановый отделяют, а водно-ацетонитрильный еще раз промывают гексаном и отбрасывают. Объединенные гексановые экстракты сушат безводным сернокислым натрием путем фильтрования и концентрируют под вакуумом до 5 мл. Если проба очищена недостаточно, то ее следует пропустить через колонку (30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого натрия (2 - 3 см), окиси алюминия для хроматографии (3 см), активированного угля КАД - молотый или ОУ-А (3 см) и безводного сернокислого натрия (1 см). Предварительно через колонку пропускают 40 - 50 мл хлороформа для уменьшения сорбционной емкости угля. Из колонки актеллик элюируют 120 мл хлороформа при отсасывании с помощью водоструйного насоса. Хлороформ концентрируют до объема 0,3 - 0,5 мл и количество инсектицида определяют хроматографическими методами;

    б)  очистка после экстракции хлороформом. Полученный экстракт фильтруют

через  слой  безводного сернокислого натрия и концентрируют под вакуумом до

0,5  -  1,0  мл. Остаток растворителя испаряют на воздухе. К сухому остатку

приливают 30 мл смеси ацетона с 0,05 н CaCl  (соотношение компонентов 1:1),

                                           2

пробу  переносят  в  делительную  воронку,  фильтруя через бумажный фильтр,

колбу  споласкивают еще 20 мл смеси ацетона с CaCl . В воронку добавляют 30

                                                  2

мл   гексана   для  извлечения  токсиканта.  Гексановую  фракцию  отделяют,

водосолеацетоновую  промывают  еще два раза гексаном по 20 мл. Объединенный

гексановый   экстракт   фильтруют  через  безводный  сернокислый  натрий  и

концентрируют  до  0,3  -  1,0  мл.  Если проба очищена недостаточно, то ее

дополнительно чистят на колонке, как указано выше;

в) очистка после экстракции водным ацетоном. Объединенные экстракты переносят в делительную воронку, добавляют 30 мл гексана для извлечения токсиканта. Далее поступают так, как описано в способе очистки "б".

Экстракты из почвы очищают путем переэкстракции в н-гексане (смотри способ "б").

2.5.2. Хроматография в тонком слое

На расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической пластинки с тонким слоем силикагеля, в который внесен флуоресцеин, или на "Силуфол UV-254" наносят сконцентрированные экстракты проб и стандартный раствор актеллика в виде пятен диаметром не более 0,5 см. Если в пробе содержится много инсектицида, то рекомендуется брать часть пробы или наносить экстракт в 4 - 5 точек. Стенки колб тщательно смывают несколькими каплями растворителя, который также наносят в центр пятна. Хроматографические пластинки ставят в камеру для хроматографирования и ожидают, пока фронт растворителя поднимется на высоту 10 см. Хроматографируют в системе гексан - ацетон (5:1) или гексан - этилацетат (7:3). Далее пластинку подсушивают на воздухе и проявляют одним из проявляющих реагентов. Следует указать, что наибольшей чувствительностью обладает проявитель с 2,6-дибром-N-хлорхинонимином и 4-(P-нитробензил)пиридином.

Пластинки со слоем силикагеля, в который внесен флуоресцирующий краситель, или пластинки "Силуфол UV-254" можно просматривать в хроматоскопе, не проявляя их. Инсектицид определяют по тушению флуоресценции.

    R   актеллика  в  системе  гексан  -  ацетон (5:1) составляет 0,75, а в

     f

системе гексан - этилацетат (7:3) - 0,51.

    Содержание актеллика в исследуемом объекте вычисляют по формуле:

 

                                   A х 1000

                               X = --------,

                                      P

 

где:

X - содержание препарата в пробе, мг/кг;

A - количество препарата, найденное в пробе при сравнении со стандартом, мкг;

P - навеска исследуемой пробы, г.

2.5.3. Газохроматографическое определение

После отгонки растворителя к сухому остатку добавляют 1 или <...> мл гексана, колбу закрывают пробкой, тщательно обмывая ее внутреннюю поверхность. Аликвотную часть пробы (2 - 5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

    Условия  хроматографирования:  хроматограф   с  термоионным  детектором

(ДТИ), колонка  стеклянная,  заполненная  5%  SE-30 на хроматоне  N-AW-ДМСS

(0,16 - 0,20 мм). Температура колонки 190°, испарителя 230°. Скорость газа-

                                                    -11

носителя азота 60 мл/мин.  Фоновый  ток (1 - 4) х 10     А,  рабочая  шкала

                      -10

электрометра  2,5 х 10     А.   Время  удерживания  актеллика  в  указанных

условиях 2,8 мин.

    Содержание   актеллика   в   пробе   определяют  методом  стандартов  и

рассчитывают по формуле:

 

                              H  х V  х C  х V

                               2    1    1    3

                          X = -----------------,

                                 H  х V  х P

                                  1    2

 

    где:

    X - количество препаратов в пробе, мг/кг;

    C  - количество препарата в стандартном растворе, мкг/мл;

     1

    H  - высота пика стандартного раствора, мм;

     1

    H  - высота пика анализируемого раствора, мм;

     2

    V  - объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, мкл;

     1

    V  - объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, мкл;

     2

    V  - объем экстракта пробы для анализа, мл;

     3

    P - навеска пробы, г.

2.6. Обработка результатов анализа приведена в 2.5.2 и 2.5.3.

2.7. Авторы

Настоящая методика включает разработки авторских коллективов:

1. Петрова Т.М., Андреев Ю.Б., Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.

2. Красных А.А., Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, пос. Рамонь Воронежской области.

 

 






Яндекс цитирования

© www.ussrdoc.com, 2011.